Home - Rasfoiesc.com
Educatie Sanatate Inginerie Business Familie Hobby Legal
Meseria se fura, ingineria se invata.Telecomunicatii, comunicatiile la distanta, Retele de, telefonie, VOIP, TV, satelit




Biologie Chimie Didactica Fizica Geografie Informatica
Istorie Literatura Matematica Psihologie

Biologie


Index » educatie » Biologie
Extractia adn din orice e viu


Extractia adn din orice e viu


EXTRACTIA ADN DIN ORICE E VIU




ADN-ul este molecula informationala care se gaseste in toate organismele vii. Molecula de ADN este alcatuita din 2 lanturi polinucleotidice complementare legate prin legaturi fosfodiesterice, cu bazele azotate spre interior si gruparile fosfat spre exterior. Bazele azotate sunt legate prin punti de hidrogen (A=T; G≡C).



La plante si animale, majoritatea ADN-ului se afla in nucleu, de aceea pentru extractia sa este nevoie de distrugerea peretelui celular.


Orice metoda de extractie a ADN-ului cuprinde urmatoarele etape:

1.     alegerea materialului biologic;

2.     distrugerea peretelui celular in scopul eliberarii continutului (liza celulara); in aceasta etapa, ADN-ul este scos din interiorul nucleului;

3.     separarea ADN-ului de debriurile (fragmentele) celulare.

ETAPELE EXTRACTIEI ADN


Pasul 1. Se pun intr-un blender urmatoarele

  • 1/2 cana de material biologic (100ml)
  • 1/8 lingurita de sare de masa (mai putin de 1ml)
  • 1 cana de apa rece (200ml)

Blend la maximum, 15 sec. Miscarea si fortele fizice din blender distrug peretele celular.


Obs. Apa rece creste randamentul de obtinere a unei cantitati mari de ADN si protejeaza molecula de ADN de enzimele care pot sa-l rupa.

Apa sarata ajuta ADN-ul sa precipite (solidifica si apare) cand se adauga alcool.


Pasul 2. Adaugare de detergent


Se strecoara "supa" obtinuta la pasul 1 si se pune intr-un alt recipient (cam o cana).

Se adauga 2 linguri de detergent (~30mL) si se amesteca.

Se lasa amestecul sa stationeze 5-10 min.

Amestecul obtinut se toarna in recipienti mici, astfel incat sa fie 1/3 plini.


Detergentul are rolul de a rupe membranele lipidice.



Pasul 3. Adaugare de enzime

Se adauga o cantitate mica de enzima si se amesteca apoi, cu mare grija pentru a evita ruperea ADN-ului (daca ADN-ul se rupe, va fi mai greu de vazut

Ca enzime se folosesc: bromelaina, ficina, papaina, actinidina.

Ca surse de enzime, se pot folosi: suc de ananas (bogat in papaina), papaya, smochine, ghimbir, kiwi, solutie de sters lentilele de contact.

In celula, ADN-ul este asociat cu proteine (histone) cu rolul de a stabiliza structura ADN-ului, de a-l proteja.

Enzimele au rolul de a taia aceste proteine care ajuta si la impachetarea ADN.


Pasul 4. Precipitarea ADN ului cu alcool

Se inclina usor tubul cu proba si se adauga incet alcool rece (70-95% alcool izopropilic sau alcool etilic) care va forma un strat in partea de sus a tubului.

Volumul de alcool introdus = volumul de proba din tub

ADN-ul va trece in stratul de alcool. Se poate utiliza un betisor de lemn


Obs. Alcoolul rece mareste randamentul de obtinere a ADN si, de asemenea, ajuta ADN-ul sa precipite mai repede.

Alcoolul este mai putin dens decat apa, asadar va pluti la suprafata. Deoarece se formeaza doua straturi diferite, toate grasimile si proteinele pe care le-am scos in primii doi pasi se vor aseza in partea de jos, apoasa, in timp ce ADN -ul prefera partea de sus, alcoolica.



ADN-ul extras se poate pastra in tampon TE (Tris-EDTA) pH= 8, pentru a-l proteja de actiunea enzimelor, care-l pot rupe.







Politica de confidentialitate





Copyright © 2023 - Toate drepturile rezervate