DETERMINAREA NUMARULUI TOTAL DE DROJDII SI MUCEGAIURI

DETERMINAREA NUMARULUI TOTAL DE DROJDII SI MUCEGAIURI

DEFINITII

Drojdii - microorganisme eucariote, mono sau pluricelulare, care se reproduc asexuat prin inmugurire sau, mai rar, prin sciziune. Unele drojdii se pot reproduce si sexuat (meioza). Majoritatea drojdiilor sunt saprofite si multe dintre ele au activitate fermentativa.

Mucegaiuri - microorganisme eucariote, care prezinta organe de reproducere diferentiate. Sunt agentii mucegairii.

Tipuri de produse alimentare pentru care se recomanda analiza (Anexa 1

PRINCIPIUL METODEI

Prin aceasta metoda, numarul de drojdii si mucegaiuri se apreciaza indirect, pe baza coloniilor generate de celulele acestor microorganisme prezente in proba de analizat, care se formeaza cand proba sau o dilutie a acesteia vine in contact cu un mediu nutritiv gelozat, dupa termostatare la 25°C timp de 72 de ore.

ECHIPAMENTE

Omogenizator

Balanta analitica

Termostat reglat la 25°C

Baie de apa pentru fluidificarea mediului de cultura reglata la 45°C

MATERIALE SI STICLARIE

25g produs alimentar

225 ml 0.1% apa peptonata

Cutii Petri Φ10 cm sterile

Pipete de 1 cm³ si 10 cm³ sterile

Eprubete cu ser fiziologic steril, cate 9 cm³ per eprubeta

Baloane cu ser fiziologic steril

Pungi sterile pentru omogenizarea probelor solide sau semisolide

Numarator de colonii

Reactivi pentru determinare

Mediu de diluare: Solutie ser fiziologic

Mediu de cultura: Anexa 2

DESCRIEREA MODULUI DE LUCRU

Se cantaresc 25 g proba produs alimentar, peste care se adauga 225 ml apa peptonata. Se omogenizeaza timp de 1 min.

Pentru diluarea probei se aplica schema de dilutie din figura 1.

Figura 1 Schema de lucru pentru realizarea dilutiilor si inocularea probelor

*Toate probele se realizeaza in duplicat.

Cu o pipeta sterila se transfera in fiecare cutie Petri sterila, cate 1 cm² proba de analizat, daca produsul este lichid sau cate 1 cm² dilutie initiala, in cazul altor produse. Se realizeaza apoi prima dilutie decimala a probei de analizat (10^-1). Se repeta aceste operatii cu dilutiile urmatoare, folosind cate o noua pipeta sterila pentru fiecare dilutie decimala (Fig.1).

Se toarna in fiecare cutie Petri cate cca. 15 cm² mediu PCA (Plate Count Agar) cu temperatura de 45±5°C.

Mediile se uniformizeaza rapid in placi, prin rotirea placilor in plan orizontal, apoi sunt lasate in repaus pana se produce solidificarea lor.

* Se noteaza pe capacul placilor numele probei, mediul utilizat, dilutia inoculata, temperatura la care se va face termostatarea.

Dupa solidificarea mediului placile se termostateaza cu capacul in jos, pentru 3-5 zile la temperatura de 25-28°C.

REZULTATE

Se retin cutiile care contin 15.300 de colonii. Numarul de ufc de drojdii si mucegaiuri per ml sau gram de produs se calculeaza ca medie ponderata, cu formula urmatoare:

unde

ΣC - suma coloniilor numarate in toate cutiile retinute;

n₁ - numarul de cutii retinute dintr-o dilutie

n₂ - numarul de cutii retinute din dilutia succesiva

d - factorul de dilutie corespunzator primei dilutii din care s-a realizat retinerea placilor.

Rezultatele calculate se rotunjesc la doua cifre semnificative.

Se exprima gradul de contaminare printr-un numar cuprins intre 1,0 si 9,9 multiplicat cu 10^x, unde x este puterea atribuita lui 10.

Daca cele doua cutii Petri, la nivelul probei de analizat (produse lichide) sau al dilutiei initiale (alte produse) contin mai putin de 15 colonii, se face media aritmetica, m, a coloniilor numarate in cele doua cutii.

Rezultatul se exprima sub forma:

- numar de ufc de drojdii si mucegaiuri estimat per ml:

N_E=m (produse lichide)

- numar de ufc de drojdii si mucegaiuri estimat per gram

N_E=m·d^-1 (alte produse), in care d este factorul de dilutie al dilutiei initiale (alte produse).

Daca cele doua cutii Petri , la nivelul probei de analizat (produse lichide) sau al dilutiei initiale (alte produse) nu contin nicio colonie, rezultatul se exprima sub forma:

mai putin de o ufc de drojdii sau mucegaiuri per ml (produse lichide);

mai putin de 1·d^-1 ufc de drojdii sau mucegaiuri pe gram (alte produse)

ANEXA 1

GRUPELE PRINCIPALE DE PRODUSE PENTRU CARE SE RECOMANDA ANALIZA

ANEXA 2

CONDITII DE CULTIVARE SI COMPOZITIA MEDIILOR DE CULTURA PENTRU NUMARAREA MICROORGANISMELOR

Conditiile particulare de lucru conform prevederilor din normativele romanesti adaptate la conditiile ISO (SR ISO) sunt prezentate in tabelul 1.

Tabelul 1. Conditii de cultivare pentru numararea microorganismelor impuse de normativele ISO

Compozitia mediilor de cultura recomandate pentru evaluarea diferitelor categorii de microorganisme este prezentata in tabelul 2.

Tabelul 2 Compozitia mediilor de cultura recomandate pentru determinarea si confirmarea numarului de unitati formatoare de colonii