Home - Rasfoiesc.com
Educatie Sanatate Inginerie Business Familie Hobby Legal
Doar rabdarea si perseverenta in invatare aduce rezultate bune.stiinta, numere naturale, teoreme, multimi, calcule, ecuatii, sisteme



Biologie Chimie Didactica Fizica Geografie Informatica
Istorie Literatura Matematica Psihologie

Biologie


Index » educatie » Biologie
» Metode de evidentiere a organitelor celulare prin tehnici de colorare adecvate


Metode de evidentiere a organitelor celulare prin tehnici de colorare adecvate




Metode de evidentiere a organitelor celulare prin tehnici de colorare adecvate

Coloratii citoplasmatice

Tehnica colorarii cu hemalaun-eozina (HE)

Coloratia cu hemalaun-eozina este probabil cea mai raspandita coloratie in majoritatea laboratoarelor de citologie normala si patologica




Metoda HE

Colorant nuclear bazic (hemalaunul = hemateina+ alaun de K)

Colorant citoplasmatic eozina.

Etape colorare

1-precolorare -deparafinare+hidratare

2-colorarea propriu-zisa:

A)    Introducerea sectiunilor intr-o baie care contine hemalaun timp de 5-10min.

B)     Spalarea cu apa 5-10min.

C)    Diferentierea in alcool clorhidric (alcool 96%-100ml sol. HCl-0,5 ml)

D)    Introducerea sectiunilor timp de cateva secunde in apa distilata pentru eliminarea excesului de colorant.

E)     Sugativarea usoara.

Postcolorare (deshidratare, clarificare, montarea lamelei, etichetare)

Rezultatele colorarii cu HE - aplicatii

RETICULUL ENDOPLASMATIC reprezinta un sistem complex de citomembrane , avand forme variate si este dotat cu o plasticitate ce-i confera heterogenitate functionala. Se gaseste in citoplasma ca un organit de forma veziculara, tubulara sau de saci colabati, il gasim in aproape toate celulele cu exceptia hematiei adulte, trombocitelor si ectoplasma celulelor epiteliului intestinal. Este un organit foarte activ, participand la procesele de catabolism, in sinteza proteinelor si acumuleaza calciul activ necesar contractiei musculare.

RE se imparte in RER (sistem canalicular tridimensional citomembranar, avand ribozomi atasati de sistemul canalicular) si REN. Cea mai importanta functie a RER este sinteza proteinelor destinate exportului.

Tipul de celula:    Hepatocite

Elemente de evidentiere : Corpii Berg

In coloratia HE in citoplasma hepatocitelor se evidentiaza corpii Berg (aglomerari de RER detectabile la microscopul fotonic), care apar sub forma unor granulatii de culoare albastra, dispuse in intreaga citoplasma a hepatocitelor si care reprezinta RER de la acest nivel.

Tipul de celula:    Adipocite (Hipoderm)

Elemente de evidentiere : nucleul excentric

Pe o sectiune efectuata la nivelul pielii se identifica cele trei straturi (epiderm, derm si hipoderm), foliculi pilari, glande sebacee, etc. In hipoderm se gasesc grupuri de celule adipoase, incarcate cu lipide care ocupa aproape toata citoplasma. Celulele au forma sferica, citoplasma necolorata (lipidele nu se coloreaza).

Lipidele intracitoplasmatice imping nucleul la periferie, turtind-ul, adipocitul capatand astfel aspectul de " inel cu pecete".

Tipul de celula: Glanda salivara

Glande exocrine cu mecanism de secretie de tip merocin - celula isi mentine integritatea intre cicluri secretorii succesive.

In coloratia HE, citoplasma acinilor mucosi NU este colorata,datorita prezentei produsilor de secretie (MPZ acide si neutre).

Tipul de celula: Insulele Langerhans. Pancreas endocrin

In coloratia HE o insula Langerhans apare ca o structura mai putin colorata printre acini, care sunt intens colorati. Este formata din cateva zeci, pana la cateva mii de celule endocrine, de dimensiuni mici, rotunde sau poligonale, cu citoplasma eozinofila, palida, cu nuclei rotunzi, albastru-violet. Celulele sunt asezate in cordoane care se anastomozeaza si printre care se gasesc numeroase capilare sangvine. Celulele din centrul insulei (mai numeroase - 70%) denumite celule B sau β, secreta insulina, iar celulele din exteriorul insulei (mai putine 20%) denumite celule A sau α, secreta glucagonul. Cei 2 hormoni (insulina si glucagonul) intervin in mod decisiv in metabolismul glucidic.

Tehnica Benoit

Punerea in evidenta a mitocondriilor care apar colorate in rosu, citoplasma si nucleii in verde, iarlipidele in negru.

Se evidentiaza microvilii, cilii din rinichi, intestin, trahee.

Etape de lucru:

Fixare cu amestecul Benoit 24-48h

Spalarea cu apa

Postfixarea cu formol 10%

Spalare cu apa

Coloratia cu hematoxilina ferica (HF) Heidenheim

Ofera detalii structurale nucleare pretioase, incluziuni celulare, striatii muschi striati

Etape de lucru

A)    Pregatirea colorantului



Hematoxilina 10%+ al.etilic 96% maturare 2-3 saptamani

Solutia coloranta: 10ml sol. Hematoxilina 10% + apa distilata 90ml.

Mordansare= pregatire selectivitatii pentru coloranta

B)     Tehnica de lucru

Mordansare pentru nucleu 30 min. -24h

Colorare cu HF 30min-24h

Spalare rapida cu apa distilata

Diferentiere microscop

Spalare

Colorare

Deshidratare, clarificare, montare in balsam de Canada.

C)    Rezultate

Cromatina apare colorata in negru-albastrui,

Citoplasma incolora

Centrozomi si granule de secretie pot fi evidente

Tipul de celula:    Celule neoplazice

Elemente de evidentiere : Modificari nucleare in transformari maligne

Pe o sectiune efectuata la nivelul unei tumori maligne se identifica grupuri de celule neoplazice de diferite marimi si forme care prezinta urmatoarele modificari:

inversarea raportului nucleu/citoplasma (normal<1, tumora>1)

nuclei pleomorfi, monstruosi, ce ocupa aproape toata citoplasma, inegali ca forma si marime, cu cromatina nucleara laxa

nuclei denudati, membrana nucleara este incizata, margini neregulate, crenelate, citoplasma redusa

mitoze atipice

nucleoli modificati ca forma si marime

Coloratie May Grumwald-Giemsa MGG

May-Grünwald-Giemsa apartine colorantilor neutri si este o coloratie panoptica (metoda permite identificarea in mod selectiv a componentilor celulari in functie de pH-ul specific). Este colorantul de electie al frotiurilor sangvine.

Vezi lp. 6

Granulocite neutrofile (nucleu segmentat)

Pe un frotiu recoltat din sangele periferic se observa predominanta celulelor anucleate, respectiv a hematiilor. Din loc in loc se gasesc si elemente nucleate.

Leucocitele neutrofile (granulocitele neutrofile) sunt cele mai numeroase leucocite, fiind prezente in sange in procent de 45-75%. Sunt celule globuloase, emit pseudopode ceea ce le confera o mare mobilitate. Durata de viata a neutrofilelor este de 2-5 zile, ele persistand in sange 6-12 ore. Au nucleu caracteristic, segmentat, prezentand 2-5 lobi nucleari legati intre ei prin punti de cromatina. Asezarea lobilor in neutrofil realizeaza forme diferite, asemanatoare literelor din alfabet (C, E, U, V, S, Z, Y). La sexul feminin aproximativ 3% din neutrofile prezinta la unul din lobii nucleari corpusculul Barr, ce reprezinta cromatina sexuala condensata a unuia din cei doi cromozomi X. Corpusculul sexual apare la microscop ca o prelungire a lobului nuclear sub forma unui bat de toba.

Citoplasma neutrofilului este slab acidofila, colorata in roz palid. Gradul de segmentare al nucleului corespunde cu varsta celulei. In citoplasma se gasesc numeroase granulatii fine.

Limfocite (nucleu sferic)

Limfocitul este o celula sferica sau usor ovala, se gaseste in sange in proportie de 25-45%. Nucleul limfocitului este mare,usor incizat, colorat in violet, ocupand mare parte din citoplasma care este redusa la un inel perinuclear. Citoplasma este bazofila, contine granulatii azurofile, organite celulare.

Durata de viata in sangele periferic este diferita, fiind situata intre cateva zile si un an, dar unele limfocite pot atinge si varsta de 5-25 ani. Limfocitele joaca un rol important in imunitate (limfocitele B si T)

- Granulocite eozinofile (nucleu bilobat)

Eozinofilul se gaseste in sangele periferic in proportie de 1-5%, fiind printre cele mai mari elemente din grupul granulocitelor segmentate. Celulele sunt sferice, cu nucleu bilobat sau "in desaga". Se pot intalni in sangele circulant si eozinofile cu nucleu trilobat. Citoplasma este intens acidofila, contine organite celulare si granulatii acidofile.

Durata de viata a eozinofilelor este de 8-12 zile.

Monocite (nucleu reniform)

Monocitele se gasesc in sangele periferic in proportie de 6-8%. Se impart in monocite mici-inactive si monocite mari-active. Sunt celule globuloase, cu citoplasma abundenta, bazofila, ce se coloreaza in albastru-cenusiu. Nucleul celulei este nesegmentat, mare, deseori reniform. Monocitul impreuna cu macrofagul tisular joaca un rol important in apararea organismului.

Durata de viata in sangele circulant este de 10-60 ore.






Politica de confidentialitate


Copyright © 2020 - Toate drepturile rezervate