Home - Rasfoiesc.com
Educatie Sanatate Inginerie Business Familie Hobby Legal
Doar rabdarea si perseverenta in invatare aduce rezultate bune. stiinta, numere naturale, teoreme, multimi, calcule, ecuatii, sisteme


Biologie Chimie Didactica Fizica Geografie Informatica
Istorie Literatura Matematica Psihologie

Chimie


Index » educatie » Chimie
» HISTOENZIMOLOGIE, HISTOCHIMIE


HISTOENZIMOLOGIE, HISTOCHIMIE




HISTOENZIMOLOGIE, HISTOCHIMIE

METODA FROTIURILOR

n      se realizeaza intinderea celulelor in monostrat pe o lamela de sticla.

n      Pot fi examinate :

  1. celulele sangvine
  2. celulele epiteliale descuamate sau exfoliate
  3. sedimentele celulare

TIMPII




n      recoltare

n      intindere: se folosesc doua lame de sticla

u    lama portobiect - cea pe care se efectueaza frotiul

u    lama executoare - cu care se intinde frotiul , prin glisare la un unghi de 45°.

n      uscare

METODA PANOPTICA PAPPENHEIM

n      pentru colorarea frotiului sangvin.

  1. solutia May-Grunwald - contine EOZINAT DE ALBASTRU DE METILEN solubilizat in amestec de alcool metilic si glicerina neutra
  2. solutia Giemsa  - contine EOZINAT DE AZUR DE METILEN solubilizat in amestec de alcool metilic si glicerina neutra

Frotiul trebuie sa fie :

n      subtire - cu un singur strat de celule

n      intins uniform

n      ambele margini pe lama

n      se termina in franjuri pe lama , ocupand cca. 2/3 din aceasta

n      la margine se scrie numele pacientului sau un nr. de ordine

REZULTATE

n      nuclei - violet

n      citoplasmele agranulocitelor - albastru citoplasmele granulocitelor - roz

n      granulatii:

u    neutrofile - rosu- violet

u    bazofile - albastru inchis spre negru

u    eozinofile - rosu -portocaliu

HISTOCHIMIA

n      interpretarea biochimica a celulelor sau tesuturilor in raport cu oranizarea lor celulara.

            PRINCIPIU

            Se bazeaza pe afinitatea pe care o au unii coloranti pentru anumite grupari chimice pe care vrem sa le localizam.

n      Substantele chimice celulare si tisulare se identifica prin reactii chimice care duc la obtinerea de compusi colorati , insolubili si observabili la M.O.

n      HISTOFOTOMETRIA = analiza cantitativa, in functie de intensitatea culorii

Conditiile minime necesare unei reactii histochimice

n      substanta analizata

u     sa se conserve "in situ" ,

u    fixarea utilizata trebuie sa conserve structura celulei si sa impiedice deteriorarea componentelor celulare

u    metoda folosita trebuie sa fie specifica pentru substanta sau gruparile chimice care vor fi examinate.

n      produsul de reactie

            - insolubil - previne dispersia sau difuzia produsului de reactie

-   colorat - permite examinarea

 

n      reactivul histochimic - trebuie sa fie specific.

HISTOCHIMIA GLUCIDELOR

n      monozaharide           

                                solubile

n      oligozaharide

n      polizaharide -  libere sau combinate cu proteine

n      METODA PAS ( per-iodic acid Schiff)

n      METODA CU CARMIN AMONIACAL BEST

n      BAZOFILIA

n      METACROMAZIA

METODA PAS

n      evidentierea glicogenului, GAG, glicoproteinelor si glicolipidelor.

n      PRINCIPIU

            grupari glicol  oxidare cu acid periodic  grupari aldehidice + cu reactivul Schiff          precipitat rosu violaceu vizibil la M.O

METODA PAS- GLICOGEN

n      specificitatea metodei depinde de pretratamentul cu enzime glicogenolitice de tipul amilazei salivare. Se considera ca structurile colorate PAS care dispar in urma pretratamentului cu amilaza contin glicogen

CARMIN AMONIACAL BEST

n      evidentiaza glicogenul - polimer cu solubilitate redusa in apa . Daca fixarea lui nu este prompta, enzimele hidrolitice il descompun in glucoza care este foarte solubila in apa si difuzeaza.

n      REZULTATE : granule rosii in citoplasma




BAZOFILIA

n      proprietatea substantelor glucidice de a se colora cu coloranti bazici de tipul  albastru alcian si albastru de metil.

n      poate fi utilizata si pentru evidentierea lipidelor si proteinelor cu caracter acid

METACROMAZIA

n      Capacitatea unui substrat de a se colora intr-o alta culoare decat cea a colorantului.

n      PRINCIPIU:

-  existenta unor grupari anionice aflate la o distanta foarte mica una de alta formand agregate cu proprietati de absorbtie a luminii vizibile diferite de a moleculelor neagregate.

HISTOCHIMIA LIPIDELOR

n      PRINCIPIU:

colorantul trebuie sa fie mai solubil in lipide decat in propriul solvent

SUDANOFILIA

n      Coloranti Sudan :

n      III - rosu-portocaliu

n      IV - rosu

n      B - negru

n      BB - albastru

n      HISTOCHIMIA Pdetecteaza structura primara a proteinelor

n      Reactii nespecifice proteinele celulare si tisulare sunt identificate pe seama aminoacizilor

n      Reactii specifice - folosite pentru identificarea heteroproteinelor

ROTEINELOR

HISTOCHIMIA PROTEINELOR
Reactii nespecifice

u    Tirozina - Reactia MILLON

u    Arginina - Reactia SAKAGUSHI - pentru studiul distributiei proteinelor bazice in nucleu

u    Triptofan

HISTOCHIMIA PROTEINELOR
 
Reactii specifice

n      folosite pentru identificarea heteroproteinelor de ex. nucleoproteinele care se evidentiaza pe seama acizilor nucleici.

  1. Metoda FEULGEN
  2. Bazofilia
  3. Metoda BRANCHET
  4. METODA FEULGEN

Molecula AND hidroliza acida dezoxiriboza + reactiv Schiff          precipitat rosu-violaceu

METODA BRANCHET( verde metil-pironina)

n      cercetarea bazofiliei data de acidul fosforic din structura acizilor nucleici

n      verde de metil - are afinitate pentru ADN-ul nuclear pe care il coloreaza in verde

n      pironina - ARN-ul nucleolar si citoplasmatic, pe care il coloreaza in rosu

HISTOCHIMIA ENZIMELOR

n      evidentiaza localizarea si activitatea enzimelor.

n      PRINCIPIU:

- reactii chimice care au ca rezultat un compus colorat si insolubil. In cazul in care produsul rezultat este solubil , se insolubilizeaza printr-o reactie de CAPTURA.

ETAPELE OBTINERII UNUI PREPARAT CITOENZIMOLOGIC

n      recoltarea

n      fixarea - prin congelarea rapida la temparaturi foarte joase

n      sectionarea

n      incubarea -intr-un mediu care ofera enzimei conditii cat mai apropiate de cele in vivo.

n       montarea - se realizeaza in mediu hidrosolubil - glicerina sau sirop Apathy

REACTII CITOENZIMOLOGICE

n      METODA PEARSE- evidentiaza dehidrogenazele

n      METODA GÖMÖRY ( captura de ioni metalici)- evidentierea hidrolazelor

METODA PEARSE

n      peroxidaze

n      Succinatdehidrogenaza

APLICATII PRACTICE

- SDH - enzima marker a mitocondriilor

METODA GÖMÖRY( captura de ioni metalici)

n      pentru evidentierea fosfatazelor

n      PRINCIPIU

-   o reactie de precipitare a acidului fosforic eliberat de enzima de la nivelul substratului

METODA GÖMÖRY

Compusul rezultat din actiunea enzimei reactioneaza cu:

u    sulfura de amoniu pentru a produce un precipitat negru

u    sulfura de cobalt pentru hidrolaza alcalina

u    sulfura de plumb pentru cea acida

u    APLICATII PRACTICE

- evidentierea fosfatazei alcaline - enzima cu rol de transport 







Politica de confidentialitate


Copyright © 2019 - Toate drepturile rezervate

Chimie




Polietilena de inalta presiune
Efectele biologice si mecanismele moleculare de actiune ale radiatiilor UV
IONUL MAGNEZIU (Mg2+)
FACTORI CARE INFLUENTEAZA REZISTENTA LA COROZIUNE
Superoxid dismutaza (SOD)
Reactiile ionului silicic (metasilicic) - SiO32-
Halogenii
Diagramele Paurbaix
REACTII CU TRANSFER DE PROTONI
ATOMUL